TPA Puhdistus protokollat ​​

Kudosplasminogeeniaktivaattori tai TPA on eräänlainen seriiniproteaasi, joka on proteiini pystyy tuhoamaan verihyytymiä. TPA löytyy solujen sisäisesti kattavat verisuonia. TPA protokollat ​​ovat osa lääke-ja lääketieteellisen tutkimuksen aivohalvauksia, sekä sydän-ja keuhko-sairauksien, kuten keuhkoveritulppa ja sydäninfarkti. TPA puhdistus viittaa eristäminen tämän proteiinin muiden molekyylien läpi sarjan prosesseja, kuten kromatografia ja elektroforeesi. Puhdistus TPA kohteesta Hog Munuaiset

Tätä protokollaa käytetään tutkimuksissa fibrinolyysi prosessi karkaa tuotteen hyytymisen kutsutaan fibriinin, joka liittyy kasvainten muodostumisen. Teknikot ote TPA asetoni-kuivattu karju munuaisten kaliumasetaatin puskuria, pH 4.2. Sitten ne lisätään ammoniumsulfaattia aiheuttaa solun sademäärä. Ne lisäävät n-butyyli-sepharose kuin näytteet, jotka analysoitiin sitten chromatographer. Concanavalin lisätään myös ja chromatograph.y erottaa eri proteiineja suoritetaan.
Puhdistaminen TPA kiinalaisten munasarja ja E. coli solut

taudessa on tärkeä tekijä onnistumisen biologisia kokeita. Puhdistettu TPA on myös kaupallisesti saatavilla, mikä säästää aikaa ja välttää vaarantumisen riskin kokeilun vuoksi huonosti puhdistettu ratkaisu. Tämä protokolla edellyttää puhdistusmene TPA nisäkkäiden ja bakteerisoluissa. Teknikot saostua solun näytteitä, suodos niitä ja suorittaa affiniteetti ja geelikromatografia analyysi. Myöhemmin he analysoida ja vertailla tuloksia, ennen kaupallisen tuotannon.
Expression Active Human TPA E. coli

Selvennetty solulysaatit lisätään lysiini - Sepharose-pylvääseen, analysoitiin chromatographer ja pestiin natrium klooria. Toinen näyte ladattiin toiseen kromatografiakolonniin, joka sisältää proteiineja, joka sitoutuu TPA, jossa on erittäin korkea affiniteetti. Näyte toisessa sarakkeessa sekoitetaan liuoksen sinkki-sepharose. Syntyvä valkuainen näyttää yli 90 prosenttia puhtauden mukaan lehden "Applied and Environmental Microbiology."