Retrovirusinfektiosta pöytäkirjat

jossa RNA genomin, joka kiteytyy kuoreen ja lipidivaippa, retrovirukset sisältävät polypeptidiketjuja jotka auttavat yhdistää ne reseptoreihin limakalvojen isäntäsolujen ne tarttuvat. Kun useimmat solujen perinnöllisen informaation on koodattu DNA, että Retrovirusten sisältyy RNA; retroviruksien myös tehdä käänteistranskriptaasientsyymillä joiden avulla ne voivat noudattaa isäntä-DNA. Tiettyjen protokollien seuraa laboratorioiden määrätietoinen infektio DNA solun näitä viruksia. Valmistautuminen Laboratorio

Tietyt laboratorio laitteet ja tarvikkeet ovat tarpeen tukea parhaillaan retrovirusinfektiolla. Varustukseen kuuluu 1 pipetin tukea, 1 pipetti-man, 1 solukkoviljely huppu, 37-celsiusastetta ja 32 asteen Celsius yrityshautomot ja Eppendorf sentrifugoidaan. Tarvikkeet ovat kudosviljelmälevyille, kertakäyttöinen Pasteurpipetillä pätevä retroviraalisen kelluva, suodatussteriloitiin polybrene ja suodatussteriloitiin protamiinisulfaatin.
Valmistelu Cell Infektio

Ennen infektioon, kohde-solut on jaettu kudosviljelmän levy ja inkuboitiin yön yli 37-celsiusastetta inkubaattorissa, jossa on viisi prosenttia CO2: ta. Tarkoituksena itämisaika on luoda soluja, jotka ovat 50% konfluentteja. Valmistamiseksi solut etukäteen on tarpeen sen varmistamiseksi, että solut on optimoitu tartunnan prosessissa. Nolan Lab Stanfordin yliopistossa suosittelee soluinfektiomalleissa aina aloittaa alusta tarttumasta NIH 3T3-soluja auttaa optimoimaan testin tulokset.
Tarttumasta solut
< p> jälkeen itämisaika on päättynyt, tutkijoiden olisi varmistettava, että solut ovat terveitä ja oikea yhtymäkohta. Käyttämällä kudosviljelmän huppu, soluaineen imetään ja virussupernatanttia levitetään soluihin. Kun sovelletaan, levy varovasti heilutellaan edestakaisin että se jakautuu tasaisesti. Soluja olisi sitten spin-ympättiin sijoittamalla ne Eppendorf-sentrifugissa ja pyörivät niitä 2500 rpm yhdeksänkymmentä minuuttia lämpötilassa 30 astetta. Jälkeenpäin soluja on inkuboitu 32 ° C yhdestä kahteen päivää. Virus korvataan sitten uutetaan solujen ja sijoitetaan yrityshautomo analysoitava missä tahansa kolme seitsemän päivän kuluessa alkuperäisen tartunnan.