MBP Puhdistus protokollat ​​

MBP tai maltoosia sitovaa proteiinia on löydetty bakteereja Escherichia coli, joka on osa suolistofloorassa ihmisille ja eläimille. Puhdistus MBP liittyy useita menettelyjä, joiden tarkoituksena on erottaa proteiinin aineosia. Molekyylibiologian, MBP puhdistus on tärkeä prosessi tutkimuksen rakenteen ja toiminnan tämän proteiinin. MBP puhdistus protokollia ovat MBP sulatettu proteiinien puhdistus, pienimuotoinen MBP-fuusio ja maltoosi sitovan proteiinin fuusio tag puhdistus. MBP-fuusioproteiinien puhdistus

aikana tätä protokollaa, teknikot pestään 20 ml: lla polymeeri amyloosia hartsin kanssa Atris pH: ssa 7,4, natriumkloridia, Mercaptoethanol (ME) ja etyleenidiamiinitetraetikkahappo (EDTA), mukaan protokollat Online. Cell näytteet lisätään, sentrifugoitiin ja analysoitiin geelielektroforeesilla. Näytteet analysoitiin myös chromatographer, jossa teknikot eluaatti tai tarkkailla liuoksen ainesosien kulkiessaan kromatografiakolonniin.
Small Scale MBP-fuusio Proteiinin puhdistus

mukaan Jerusalemin heprealaisen yliopiston biologit käyttää reagenssia isopropyyli BD-1-tiogalaktopyranosidia (IPTG), spin soluviljelmissä 10 minuutin ajan 8000 kierrosta minuutissa 39,2 celsiusta. Myöhemmin ne poistetaan neste ja sekoita kylmää PBS-puskuria näytteen, joka on jaettu useisiin putkiin ja sentrifugoitiin uudelleen. Jälkeen näytteet säilytetään -112 asteessa taka analyysi.
Maltoosi sitojaproteiinin Fusion Tag puhdistus

Affinity tunnisteet ovat geneettisesti molekyylejä työskentelee molekyylibiologian havaitsemiseksi ja proteiinien puhdistamiseksi. Tämä protokolla on monimutkainen joukko menettelyjä jakaa kolmeen vaiheeseen, joita ovat rakentamisen polyhistidiiniä proteiinimarkkeri (HisMBP) kokeilu arvioida proteiinin liukoisuutta ja laajamittainen puhdistus MBP molekyylejä, mukaan Nature pöytäkirjat . Lisäksi E. coli näytteitä, teknikot käyttävät ampisilliini, kanamysiini, IPTG, anhydrotetracycline, glukoosimonohydraattia, solu lyysipuskurissa DNA polymeraasi, PCR-alukkeet, trisasetaatti--EDTA ja etidiumbromidilla.