Kiinnittynyt solut Protocol

Solut kulttuuri ovat joko muodossa viljeltiin suspensiossa, kuten verisolujen, tai solujen, kuten fibroblastien vaativat pinta, johon ne voivat liittyä. Jotkut pinnat saattavat vaatia pinnoite eri matriiseina riippuen solujen tyyppi ja tutkimus. Kaikki soluviljelmät tarvitse suorittaa ovat aseptisissa olosuhteissa. Optimaalinen ympäristö

enemmistö solutyyppejä voidaan Dulbeccon modifioitu Eaglen väliaine (DMEM) tai Roswell Park Memorial Institute (RPMI), johon on lisätty 10 prosenttia vasikan sikiön seerumia, 2 milimoles ja aminohappo glutamiinia ja antibiootteja, esimerkiksi, 100 yksikköä penisilliiniä ja 0,1 milligrammaa millilitrassa streptomysiiniä. -Soluja niiden median kosteutetussa lämpökaapissa 37 astetta ja 5 prosenttia hiilidioksidia.
Jakaminen

Solut on tarkastettava päivittäin infektio, kuoleman tai kasvun . Kun kudosviljelypulloon on 80 prosenttia päällystetty soluja, solut olisi jaettava ylläpitää solujen terveyden ja kasvun log-faasissa. Media poistetaan ja solut pestään fosfaattipuskuroidulla suolaliuoksella. Tarttuneet solut vaativat lisäämällä trypsiiniä ja etyleenidiamiinitetraetikkahappoa (EDTA) poistamaan solun tarttumisen proteiineja. Ravisteltu varovasti pitäisi poistaa solut. Media tarvitse lisätä neutraloimaan trypsiini /EDTA-liuosta.
Alaviljely

laimennettu solut ja tryspin /EDTA-liuos voidaan sentrifugoida pelletti ja pese soluja. Solut voidaan resuspendoida median ja laimennettu ja replated uusiin pulloihin. Joka kerta, kun solut on jaettu solujen kanavan numero kasvaa yhdellä.
Media Muuta

Media olisi vaihdetaan kahdesti viikossa poistamalla vanha media ja korvaamalla kanssa uusi, lämmitti media.