Solunsisäinen Värjäys protokolla virtaussytometria

Virtaussytometria on väline, joka on käyttökelpoinen tutkimuksessa solun proteiineja. Se hyödyntää valon emission tai fluoresenssinproteiinit solun sisällä . Vasta-aineita tai-antureita koodattu fluoresenssin avulla tutkitaan tiettyjä proteiineja . Virtaussytometrialla käytetään diagnosoida useita sairauksia , kuten syöpää , mutta on myös käyttökelpoinen lääketieteellisen tutkimuksen . Kiinnitys Solut

Solut on kiinnitetty vakauden säilyttämiseksisolunsisäisiä proteiineja. Useita fixatives voidaan käyttää , kuten formaldehydin tai jääkylmää asetonia . Kiinnittämisen ,solukalvon on permealized , jotta vasta-aineen päästä soluun . Detergentit, kuten Triton -tai NP - 40 , tai jääkylmää metanolia voidaan tehdä reikiä solukalvon .
Värjäys

Pese solutestopuskurissa 0,5 prosenttia naudan seerumialbumiinia laimennettu fosfaattipuskuroituun suolaliuokseen , BSA /PBS: ää . Soluja inkuboidaan estopuskurissa epäspesifisen sitoutumisen vähentämiseksi . Lisää ensisijainen vasta-aine laimennettiin estopuskurissa ja annetaan inkuboitua huoneen lämpötilassa, optimoitu ajan . Pese estopuskurilla .
Analyysi

inkuboidaan sekundaarisen vasta-aineen , joka on leimattu fluoresoivalla tag , huoneenlämpötilassa 30 minuuttia. Voit poistaa sitoutumattoman vasta pestä solujen estopuskuriin . Spin solujenpelletti ja sitten suspendoidaan PBS: ssä ja analysoida on virtaussytometri .