Kilpailukykyinen sitoutumiskoe Protocol

kilpailevan sitoutumisen määritys onkokeilu , joka määrittää sitova kapasiteetti proteiinien tai kemikaalien erikoistuneita proteiineja löytyy solun pinnalla , jota kutsutaan reseptoreihin . Käytetään usein lääketieteellisessä tutkimuksessa , mutta on myös mahdollisuus määrittää, mitkä lääkkeet sitoutuvat reseptoreihin ja muuttaa reseptorin toimintaa , mikä puolestaan ​​voi muuttaa solujen käyttäytymistä . Solujen valmistaminen

Re - keskeyttää solut jääkylmään fosfaattipuskuroitua suolaliuosta ( PBS ) . Toimenpide proteiinipitoisuus vahvista yhtä proteiinin tasot käyttämällä erikoistunut kaupallisesti saatavilla proteiini -määritystä.
Pitoisuus

Lisääradioaktiivisuuden - leimatun proteiinin tiedetään sitoutuvanreseptoriin , ligandi , soluun tai kudokseen suspension . Lisää kilpailija , joka on testi huumeiden tai proteiini tutkitaan ja inkuboidaan että radioaktiivisen ligandin ja solususpensio . Pitoisuusalueitakoelääkkeen tulisi tutkia . Inkuboinnin jälkeen erillinen sitoutunut ja sitoutumaton ligandi ja radioaktiivisuuden .
Data Analysis

Tavallinen toimenpide on määritettävä on puolienimmäispitoisuus , joka estääreseptorin joka tunnetaan myös IC50 . Tämä lasketaan piirtämälläpitoisuudet logaritmisella asteikolla X-akselilla on kuvaaja , kun taas Y- akselilla on inhibitioprosentti ,sigmoidikäyrä , joka onS - muoto, on luotu . IC50 on50 prosenttia eston kohta , javastaava konsentraatio voidaan lukeakaaviosta .