Mikä on Geelielektroforeesi?

Geelielektroforeesi on menetelmä erottaa, tunnistaa ja kuvaavat seoksia, proteiineja tai nukleiinihappoja. Denaturoitu näytteet siirtyä soveltamisen jälkeen sähkön ohut, märkä geeli valmistetaan tyypillisesti polyakryyliamidia tai agaroosista. Erotetut näytteet värjätään, jotta he voivat nähdä. Käytetään geelielektroforeesia proteiinin ja nukleiinihapon tutkimus-ja sairaaloissa tunnistaa epätavallinen proteiinien tai DNA-kuvioita sairauksien diagnosoimiseksi, geneettisiä vaurioita ja geneettiset suhteita. Näytteen valmistus

Kun pesuainetta, kuten natriumdodekyylisulfonaattia (SDS) lisätään proteiini-tai nukleiinihappo-, pesuaine yhdistävät ja avautua (denaturoitu) proteiineja ja nukleiinihappo. Proteiinien denaturoitumisen on helpompi määrittää niiden molekyylipaino elektroforeesi. Näytteen määrä tarvitaan, on tyypillisesti 100-500 nanogrammaa per näyte kaistalla proteiinien ja 5-100 ng per bändi nukleiinihappojen kokonaistilavuus noin 25-40 ui.
Geelit

geeli, joka on tyypillisesti valmistettu polyakryyliamidi-tai agaroosi, voidaan valmistaa tai ostaa erottaa näitä proteiineja. Geeli on paljon, kuten gelatiinia. Se on enimmäkseen vettä, mutta on riittävän vahva käsittelyyn. Geelit sisältävät puskuria pH: n säätämiseksi. Geeli on hyvin ohut (1-2 mm) ja suorakulmainen. Yksi puoli näyttää kampa paljon puuttuvat hampaat. Aukkoja kutsutaan kuoppiin.
Näytteet ladataan

Yksi paikoista geeli kammioon puskurilla ja denaturoitu proteiinit lisätään kuoppiin. Näytteet tunnettuja molekyylipainot lisätään ulkopuolella kuoppiin. Geelit tehdään vaihtelevia määriä polyakryyliamidia. Alhainen geelilujuus (4 prosenttia) on parempi erottamiseksi korkean molekyylipainon molekyylit, kun taas suurempi geelilujuus (12 prosenttia) käytetään korkeamman molekyylipainon molekyylejä. Liamidigradienttigeelissä vaihtelee geelin lujuus ja voi erottaa monenlaisia ​​proteiineja tappio noin resoluutio.
Electromigration

soveltaminen korkea jännite, denaturoidun proteiinien siirtyä kohti pohjaa hyvin. Mitä suurempi paino proteiinia, sitä hitaammin se liikkuu. Kun sähkö on pois päältä, proteiinit pysähtyy. Yksi poistaa geeli kammioon ja kiviä sen astian väriaine. Orgaaniset väriaineet kuten Coomassie blue tai metallia värejä käytetään värjäämään proteiineista fluoresoivia väriaineita kuten etidiumbromidi käytetään nukleiinihappojen.
Tulosten analysointi

poistamalla ylimääräistä tahra, voidaan nähdä, että seokset erotella bändejä, jotka näyttävät tikkaat. Nauhojen reunan asema verrataan matkan liikuttaa standardien molekyylipaino määritettiin näytteen kullakin kaistalla. Geeli voi olla kuivattu alkoholilla ja kuivataan niin se voidaan tallentaa. Värinvoimakkuus Bändi voidaan mitata pitoisuuden määrittämiseksi proteiinin kullakin kaistalla.
Pöytäkirjan Development

Standard protokollat ​​ovat saatavilla kanssa hyvin tunnettuja proteiineja. Jos tutkija työskentelee tuntemattomia näyte, geelilujuus, puskuri tyyppi, pH, jännite, ajoaika, ja tahra kaikki on optimoitu saada paras erottaminen ja signaalin.
pöytäkirjat