Miten tehdä vasta laimennos IHC

Immunohistokemia (IHC) on erikoistunut käyttämä tekniikka tutkijat visualisoida solujen kudoksia, jotka on sijoitettu liukumäki ja värjättiin sopiva aine, joka tunnistaa proteiini, joka on ainutlaatuinen solun tai tutkittavan kudoksen. Vasta-laimennokset (titraukset), on suoritettava käyttäen koeolosuhteissa määritelty käyttäjän oma protokolla, ei, että vasta-aineen valmistajan, koska kaksi voi olla identtisiä. Asiat Tarvitset
Cells tahra
vasta
laimennuspuskuria ("liuotin") finnish pipetit ja vinkkejä
mikrofuugiputkeen
alumiinifolio
Lab markkereita ja putki tarrat
Ice
light-suojattu slide box
Näytä lisää Ohjeet
1

Tarkista ja valmistaa vasta-aine. Varmista, että vasta-aine on käsitelty oikea palvelin, ja reagoi tarkka versio proteiinia (tunnetaan isoformista tai silmukoitumisvariantti), että testataan. Pipetoidaan varovasti ottaa 10 mikrolitraa osa tästä ja nimetä henkilökohtainen varastossa ".
P Jos vain hyvin pieniä määriä vasta ovat käytettävissä, ohita tämä vaihe.

Keeping henkilökohtainen varastossa vasta on rutiinikäytännön kaikissa laboratorioissa, sillä se estää ristikontaminaation alkuperäisen varastossa. Annostele tämän huomioon ottaen suojattu mikrofugiputkeen, tai normaali mikrofugiputkeen, joka on kääritty alumiinifolioon suojaamiseksi suoralta valolta.

Pidä putkeen jäähän, edullisesti Esky, jossa on ilma-tiivis kansi, jälleen minimoida valoa, joka voi tuhota vasta-ainetta. Merkitse muistiin alkuperäisen varastossa keskittyminen (esim. 100 yksikköä millilitrassa, 1 milligramma mikrolitraa ja niin edelleen) putkeen, kuten nimi-aineen ja mitä mahdollisesti puskuri sitä laimennetaan (esim. seerumin, suolaliuosta, tai vesi jne.).
2

Valmistetaan laimennuspuskuriin, joka tunnetaan myös vasta-liuotinta. Varmista, tämä on sopusoinnussa vasta ja immunohistokemian menettelyä käytetään, esimerkiksi se ei saa hämärtää Fluoresenssi tai estä myöhemmin johdetun vasta merkintöjä. Tee standardi immunohistokemia laimennus (myös estopuskuria) sekoittamalla 1X fosfaattipuskuroitua suolaliuosta, 1% Triton-X100, 10% vasikan sikiön seerumia ja 0,2% natriumatsidia.
3

titrataan vasta-aine. Jolla on annettu vasta-aineen pitoisuus on henkilökohtainen varastossa (ilmaistuna pitoisuus yksikköinä, kuten mikrogrammaa per mikrolitra), tilavuuden määrittämiseksi vasta hankittava 10 mikrogrammaa vasta-ainetta.

Aseta laimennussarja pipetoimalla tilavuus vastaa 2 mikrogrammaa vasta (esim. X ui), 100 mikrolitraan liuotinta ja sekoitetaan huolellisesti pipetoimalla ylös ja alas. Näistä lähtökohdista laimentaminen toteutettava samat X ui ja lisätä, että myöhemmin 100 ui liuotinta. Toistetaan kunnes 8-10 laimennoksia (tai-sarja) koostuu.

Viimeinen putki on siis pienin pitoisuus, ja sen on oltava "kyllästää" pitoisuus, joka tuottaa korkeimman signaalin kokeen aikana . Kuitenkin ihanteellinen konsentraatio on hieman enemmän tiivistettyä kuin tämä, niin että ei ole liian paljon tuotetaan signaali, joka voi aiheuttaa tausta virheitä.

Label putket oikein uuden pieninä pitoisuuksina.