Biotinylaatio protokollat ​​

Biotinylation on prosessi yhdistää biotiinia, tai H-vitamiini, proteiiniin tai muita molekyylejä. Tämä tieteellinen menettelyä käytetään useimmiten biotekniikan ja molekyylibiologian tutkimukseen liittyy DNA, proteiinit ja antigeenejä, jotka ovat molekyylejä elimistön immuunijärjestelmä tunnistaa kuin hyökkääjät. Biotinylaatio protokollia ovat biotinylaatio vasta-aineita ja peptidejä, samoin kuin solun pinnan biotinylaatio. Biotinylointi vasta

linkittää biotiinia vasta-proteiinien tuottamiseksi, kun antigeeni tulee kehon, teknikot käyttävät natriumbikarbonaattia (NaHC03) pH: ssa 9, dimetyylisulfoksidi (DMSO);

NHS -Biotin ja suolaliuosta ainetta nimeltä PBS. Näytteet sekoitetaan natriumbikarbonaattia, joka on myöhemmin lisätty NHS-biotiinia DMSO: ssa. Liuos lisätään sitten analysoidaan vasta-aineita ja inkuboitiin laite kutsutaan rotaattori neljän tunnin ajan huoneenlämmössä tai yön yli 39,2 celsiusta. Lopuksi, liuos laimennetaan PBS: llä.
Cell Surface Biotinylation

solun pinnalla biotinylaatio protokolla, teknikot käyttävät kudosviljelmässä, fosfaattipuskuroitua suolaliuosta (PBS) pH 7,4 ja sulfosukkinimidyyli-2-(biotinamido) etyyli-1 ,3-ditiopropionaatti puskuriliuoksessa tasapainoa happamuus, joka sisältää aminoryhmiä ja TrisCI, mukaan Current Protocols in Protein Science.The solut sekoitetaan biotiinia ja puskuriliuos, dekantoitiin ja sentrifugoitiin . Kiintoaineen ja erityiset proteiinit myöhemmin analysoidaan geelielektroforeesin levy.
Biotinylointi peptidien

suorittaa biotinylaation peptidien, reagenssi on NHS -SS Biotiini mukaan Philip Shepherd "-vasta-aineet: Practical Approach." Peptidit ovat lyhyitä fragmentteja aminohappoja, molekyylejä, jotka muodostavat proteiineja ja DNA: ta. Tässä pöytäkirjassa kaupallinen ratkaisu NHS-SS biotiinia liuotetaan veteen. Sitten peptidi näyte lisätään se yhdessä natriumbikarbonaatti tasapainottaa happamuutta tai pH. Sitten liuos inkuboitiin jäillä kahden tunnin ajan. Teknikot voivat tarkkailla näytteen kanssa tai ilman biotiini molekyylejä.