Miten voin Kokoonpano DNA-analyysi?

Agaroosigeelielektroforeesi on yleisin tapa visuaalisen DNA-fragmentti analyysi, jonka avulla teknikot visuaalisesti erottaa DNA-fragmenttien koon perusteella. Agaroosigeelissä yllä magneettikentän, ja koska DNA: lla on negatiivinen varaus, se liikkuu kohti positiivista loppuun magneettikentän. Pienemmät DNA-fragmentit liikkuvat nopeammin geelin läpi ja isommat palat liikkuvat hitaammin. DNA-fragmentit fluoresoivasti värjätään interkalatoiva aine tunnetaan etidiumbromidia. Tämä mahdollistaa vertailun useiden elektroforeesissa DNA-näytteiden geelillä. Asiat Tarvitset
agaroosigeeli, 0,7 prosenttia 2 prosenttia
Tris-boraatti-EDTA (TBA), trisasetaatti--EDTA (TAE), natrium litiumasetaatilla (LA), boorihappoa (SB) puskuri
Etidiumbromidi
Gel rillä
Gel tray
sähköforeesikammion
Käsineet
suojalaseja
Pipetoidaan
Electrophoresis kampa
Näytä Enemmän Ohje
Valmistautuminen 0,7 Prosenttia agaroosigeelin
1

punnitaan 0,7 grammaa agaroosin jauhetta ja sitten paikka isoon (250 ml) erlenmeyerpulloon.
2

Lisää 100ml of 1X (säännöllinen vahvuus) puskurissa (TAE, TBE, SB tai LB puskuri) ja pullo, jossa agaroosin jauhetta.
3

Mikroaaltouuni tai lämmön avulla bunsenpoltin noin yhden minuutin ajan, kunnes liuoksesta tulee kirkasta ja agaroosi on liuennut.
4

Otetaan pullo lämmönlähteen ja anna sen jäähtyä 55-60 asteeseen.
5

Lisää 1 ui (gl) etidiumbromidin jäähtyneeseen agaroosiliuosta sopivan kokoisella pipetillä yleensä 1 ml. Pyörre ratkaisu sekoitetaan.
6

Kaada geeli hitaasti geeliä lokeroon, varmistetaan ei kuplien muodostumista tämän prosessin aikana. Jos ei ole toimitettu hyvin patojen geelin kanssa tarjotin, käytä maalarinteippiä niiden muodostamiseksi.
7

Place Elektroforeesin kampa varovasti geelin, varmistaa yrityksen asema ja oikeassa suunnassa. Electrophoresis kammat voi vaihdella suuresti hampaiden lukumäärän heillä on. Anna geelin asetettu noin 25 minuuttia.
8

Peitetään geeli samaan puskuriin, jota käytetään valmistelemaan agaorse ratkaisu - tässä tapauksessa, 1X puskuria. Peitetään geeli jopa 5 ml: aan ajopuskuria.
Valmistelu ja Lataa DNA osaksi agaroosigeelissä Analyysi
9

Transfer 5-10 ui näytettäsi (s) niiden reaktioputkia tuoreita putkia. Siinä tapauksessa, että haluat käyttää koko reaktioseos, tuore putki ei ole tarpeen.
10

Lisää 0.2X täyttöpuskuria kukin oman tuoreen näytteen putkiin, jotka sisältävät DNA näyte lastaus.

11

Poista Elektroforeesin kampa hitaasti, että ette riko geeliä tai luo välilyöntiä pohjassa geelin ja geeli lokero.
12

Lisää viisi 12 ui sopiva DNA-markkeri ensimmäiseen hyvin luotu elektroforeesin kampa. Onko DNA-markkeri on sopiva riippuu koosta sirpaleiden olet odottanut teidän näytteestä.
13

Load viidestä 10 ui näytteitä otetaan jäljellä kuoppiin ja lisää yhtä määrä samaa DNA-markkerin lopulliseen hyvin.
14

Place elektrodit sähköforeesikammion kytkemällä johdot oikeisiin aukkoihin kammioon ja asettaa elektrodin 50-150 V

15

Anna geelin juosta yhdestä neljään tuntia.
Tulosten analysointi
16

Poista geeli geelistä kammioon ja aseta se joko UV tilaa visuaalisia tai laita kone, joka pystyy ottamaan valokuvan geeliä.
17

Mittaa markkereita etäisyys maahanmuuton kaivot.

18

Tontti etäisyydet vastaan ​​koko bändejä puolilogaritmi ruutupaperille ja vetää parhaiten sopiva viiva.
19

Laske etäisyydet oman tuntematon bändejä.

20

Arvio kokoisia teidän tuntematon bändit piirtämällä riviin kulkema teidän tuntematon bändejä, joka täyttää linja parhaiten.
21

Piirrä toinen viiva tästä kohtauspaikka yli koko akselin.